 |
ফাস্ট ডিএনএ লাইব্রেরি প্রিপ কিট V2 K001S-A, K001S-B
পণ্যের বিবরণ:
| উৎপত্তি স্থল: | চীন |
| পরিচিতিমুলক নাম: | GDSBio |
| সাক্ষ্যদান: | ISO9001, ISO13485 |
| মডেল নম্বার: | K001S-A, K001S-B |
প্রদান:
| ন্যূনতম চাহিদার পরিমাণ: | 1 কিট |
|---|---|
| প্যাকেজিং বিবরণ: | ছোট প্যাকেজ বা বাল্ক বিতরণ বা OEM |
| ডেলিভারি সময়: | 8 কর্মদিবস |
| পরিশোধের শর্ত: | L/C, D/A, D/P, T/T, ওয়েস্টার্ন ইউনিয়ন, মানিগ্রাম |
| যোগানের ক্ষমতা: | প্রতিদিন 1000 কিট |
|
বিস্তারিত তথ্য |
|||
| স্টক: | হ্যাঁ | বিড়াল না.: | K001S-A, K001S-B |
|---|---|---|---|
| স্পেসিফিকেশন: | K001S-A/24 rxns; K001S-B/96 rxns; নমুনা বস্তা/ 6 rxns | চেহারা: | সম্পূর্ণ, কোন ক্ষতি |
| লাইব্রেরির ধরন: | ডিএনএ | সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্ম: | ইলুমিনা |
| লোগো প্রিন্টিং: | লোগো প্রিন্টিং সহ | পরিবহন প্যাকেজ: | মোড়ক |
| উৎপাদন ক্ষমতা: | প্রতিদিন 1000 কিট | জমা শর্ত: | -20°C, 12 মাসের মেয়াদ সহ। |
| লক্ষণীয় করা: | GDSBio ডিসপোজেবল ভাইরাস স্যাম্পলিং টিউব,ক্লাস I ডিসপোজেবল ভাইরাস স্যাম্পলিং টিউব,100% নাইলন ভাইরাস স্যাম্পলিং টিউব |
||
পণ্যের বর্ণনা
দ্রুত ডিএনএ লাইব্রেরি প্রিপ কিটV2
[পণ্যের নাম]
দ্রুত ডিএনএ লাইব্রেরি প্রিপ কিট V2
[বিড়াল।নং/বিশেষণ]
K001S-A/24 rxns;K001S-B/96 rxns;নমুনা বস্তা/ 6 rxns
[পণ্যের বর্ণনা]
ইলুমিনা হাই-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মকে লক্ষ্য করে, এই কিটটি একটি টিউবে একটি সুবিধাজনক এবং সর্বজনীন ডিএনএ লাইব্রেরি নির্মাণ প্রকল্প প্রদান করে।এটি একটি ধাপে শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিংকে একত্রিত করে, লাইব্রেরি নির্মাণের সময়কে ব্যাপকভাবে সংক্ষিপ্ত করে এবং ক্লান্তিকর পদক্ষেপের কারণে সৃষ্ট ত্রুটি হ্রাস করে।খণ্ডিত ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-এর শেষ প্রস্তুতি, অ্যাডাপ্টার লাইগেশন, পরিবর্ধন এবং পরিশোধন প্রায় 2 ঘন্টার মধ্যে করা যেতে পারে।সম্পূর্ণ লাইব্রেরি পরিমাণ নির্ণয় dsDNA ফ্লুরোসেন্ট ডাই পদ্ধতি (যেমন, থার্মো কিউবিট ফ্লেক্স ফ্লোরোমিটার) বা লাইব্রেরিটিকে উপযুক্ত ঘনত্বে পাতলা করার পর পরম পরিমাণ নির্ধারণ পিসিআর দ্বারা সঞ্চালিত হতে পারে।
[নমুনার ধরন]
| আবেদন | নমুনার ধরন | প্রস্তাবিত পরিমাণ |
| পুরো জিনোম সিকোয়েন্সিং | উচ্চ মানের জটিল জিনোম | 50ng-1μg |
| পুরো এক্সোমের টার্গেট ক্যাপচার সিকোয়েন্সিং | উচ্চ মানের জটিল জিনোম | 10ng-1μg |
| পুরো জিনোমের টার্গেট ক্যাপচার সিকোয়েন্সিং | এফএফপিই ডিএনএ | ≥50ng |
| পুরো জিনোমের টার্গেট ক্যাপচার সিকোয়েন্সিং | cfDNA/ctDNA | ≥100pg |
| পুরো জিনোম সিকোয়েন্সিং | মাইক্রোবিয়াল জিনোম | 1ng-1μg |
| পুরো জিনোম সিকোয়েন্সিং (পিসিআর-মুক্ত) | উচ্চ মানের ডিএনএ |
≥50ng (কোন আকার নির্বাচন নয়) ≥200ng (আকার নির্বাচন) |
| চিপ-সেক | চিপ ডিএনএ | ≥100pg |
| টার্গেটেড সিকোয়েন্সিং | এমপ্লিকন | ≥100pg |
[স্টোরেজ কন্ডিশন এবং শেল্ফ লাইফ]
সমস্ত রিএজেন্ট -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা উচিত।লিগেশন বাফার কম তাপমাত্রায় স্ফটিকের জন্য স্বাভাবিক, এটি ব্যবহারের আগে ঘরের তাপমাত্রার সাথে ভারসাম্যপূর্ণ হওয়া উচিত।পণ্যটি 12 মাসের জন্য বৈধ।
[উপাদান]
| উপাদান | 24 rxns | 96 rxns |
| শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিং এনজাইম মিক্স | 120 μl | 2×240 μl |
| শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিং বাফার | 240 μl | 2×480 μl |
| দ্রুত DNA Ligase | 120 μl | 2×240 μl |
| ফাস্ট লিগেশন বাফার | 600 μl | 4×600 μl |
| 2× HIFI লাইব্রেরি PCR মাস্টার মিক্স | 600 μl | 4×600 μl |
| প্রাইমার মিক্স* | 120 μl | 480 μl |
* যদি একাধিক নমুনা থাকে, #K002 এবং #K003 অ্যাডাপ্টার প্রাইমার মিক্স করার পরামর্শ দেওয়া হয়।এই কিটটি সূচক সহ প্রাইমারগুলির একটি সেট সরবরাহ করে।
দ্রষ্টব্য: প্রস্তাবিত নির্বাচন পুঁতি: #NC1011 GDSPure DNA নির্বাচন ম্যাগবিডস বা AMPure XP পুঁতি।
[মন্তব্য]
1. আমরা দুই ধরনের ইউনিভার্সাল অ্যাডাপ্টার প্রাইমার সেট অফার করি (GDS অ্যাডাপ্টার, #K002 এবং #K003, আলাদাভাবে কেনা), তবে গ্রাহকরা অন্যান্য নির্মাতাদের থেকেও বেছে নিতে পারেন বা ইলুমিনা সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মের জন্য তাদের নিজস্ব অ্যাডাপ্টার সংশ্লেষ করতে পারেন।অত্যধিক অ্যাডাপ্টার অ্যাডাপ্টার ডাইমার গঠনের দিকে পরিচালিত করবে, এবং অপর্যাপ্ত অ্যাডাপ্টার কম লাইব্রেরি আউটপুট নিয়ে যাবে।অতএব, উপযুক্ত অ্যাডাপ্টারের ঘনত্ব লাইব্রেরির ঘনত্ব এবং গুণমান নির্ধারণ করে।ডিএনএ ইনপুটের বিভিন্ন পরিমাণের জন্য প্রস্তাবিত অ্যাডাপ্টারের ঘনত্ব নিম্নলিখিত সারণীতে দেখানো হয়েছে:
সারণি 1 অ্যাডাপ্টারের ঘনত্ব ব্যবহার করার প্রস্তাবিত
| ডিএনএ ইনপুট | প্রস্তাবিত Conc.অ্যাডাপ্টারের জন্য | অ্যাডাপ্টার: সন্নিবেশ মোল অনুপাত* | জিডিএস অ্যাডাপ্টার ডিলিউশন ডিগ্রি |
| 1μg | 10μM | 10:1 | কোন পাতলা |
| 500ng | 10μM | 20:1 | কোন পাতলা |
| 250ng | 10μM | 40:1 | কোন পাতলা |
| 100ng | 7.5μM | 100:1 | 3:4 |
| 50ng | 5μM | 200:1 | 1:2 |
| 25 নং | 2.5μM | 200:1 | 1:4 |
| 1ng | 1μM | 200:1 | 1:10 |
* অ্যাডাপ্টার: ইনসার্ট মোল রেশিও বলতে অন্যান্য উত্স থেকে ইনপুট ডিএনএ মোলার নম্বরের অ্যাডাপ্টার মোলার নম্বরের অনুপাতকে বোঝায়, যা নিম্নলিখিত সূত্রটি উল্লেখ করে মোটামুটিভাবে গণনা করা যেতে পারে:
ইনপুট DNA নম্বর (pmol)≈ইনপুট DNA ভর (ng)/[0.66×ইনপুট DNA গড় দৈর্ঘ্য (bp)]
*অ্যাডাপ্টারের গুণমান এবং ঘনত্ব লাইব্রেরির আউটপুটকে ব্যাপকভাবে প্রভাবিত করে, বিশেষ করে কম ইনপুট লাইব্রেরির জন্য।একটি উচ্চ-মানের উত্স থেকে অ্যাডাপ্টারটি নির্বাচন করা উচিত এবং লাইগেশনের আগে 0.1×TE সহ একটি উপযুক্ত ঘনত্বে পাতলা করা উচিত।অবিলম্বে ব্যবহারের জন্য, নিশ্চিত করুন যে প্রতিটি নমুনা সংযোজন একটি নির্দিষ্ট 5 μl, নমুনা সংযোজন ত্রুটিগুলি এড়িয়ে চলুন এবং বারবার জমাট বাঁধা এড়াতে চেষ্টা করুন।
2. 2× HIFI লাইব্রেরি পিসিআর মাস্টার মিক্সে ব্যবহৃত এনজাইমটি হল একটি বি ফ্যামিলি ডিএনএ পলিমারেজ, যার 5 '-3' পলিমারেজ এবং 3 '-5' এক্সোনিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপ রয়েছে, কিন্তু 5 '-3' এক্সোনিউক্লিজ কার্যকলাপের অভাব রয়েছে।এটির উচ্চ বিশ্বস্ততা এবং একজাতীয়তা এবং শক্তিশালী টেকসই সংশ্লেষণ ক্ষমতা রয়েছে।লাইব্রেরি আউটপুটের জন্য পরিবর্ধন চক্রের সংখ্যার কঠোর নিয়ন্ত্রণ বিশেষভাবে গুরুত্বপূর্ণ।নিম্নলিখিত সারণীটি ডিএনএ ইনপুটের বিভিন্ন পরিমাণের সাথে সম্পর্কিত পরিবর্ধন চক্রের প্রস্তাবিত সংখ্যা দেখায়:
সারণি 2 বিভিন্ন নমুনা ইনপুটগুলির সাথে সম্পর্কিত পরিবর্ধন চক্রের প্রস্তাবিত সংখ্যা
| ইনপুট ডিএনএ | প্রশস্তকরণ চক্রের প্রস্তাবিত সংখ্যা | |
| 100ng লাইব্রেরি | 1μg লাইব্রেরি | |
| 1μg | 0 | 2-5 |
| 500ng | 0 | 2-5 |
| 250ng | 1-3 | 5-7 |
| 100ng | 2-4 | 6-8 |
| 50ng | 4-6 | 8-10 |
| 25 নং | 5-7 | 9-12 |
| 10ng | 7-9 | 11-13 |
| 5ng | 9-11 | 13-14 |
| 2.5ng | 10-12 | 14-16 |
| 1ng | 11-13 | 15-17 |
দ্রষ্টব্য: 1. উপরের টেবিলটি 150bp স্ট্যান্ডার্ড DNA ব্যবহার করে পরীক্ষার ফলাফল দেখায়, যা শুধুমাত্র রেফারেন্সের জন্য।
2. অসম্পূর্ণ সংযোগকারী ব্যবহার করা হলে, একটি সম্পূর্ণ লাইব্রেরি পেতে ন্যূনতম সংখ্যক চক্র (1-3) বৃদ্ধি করা উচিত।
3. যদি ইনপুট ডিএনএর গুণমান খারাপ হয়, বা লাইব্রেরি নির্মাণের সময় আকার নির্বাচন করা হয়, তাহলে পরিবর্ধন চক্রের সংখ্যা যথাযথভাবে বৃদ্ধি করা উচিত।
[স্ট্যান্ডার্ড লাইব্রেরি নির্মাণ প্রক্রিয়া]
শেষ মেরামত
দ্রষ্টব্য: যদি এই ধাপের আগে খণ্ডিত ডিএনএ 45 μl অতিক্রম করে, বা বাফারটি শেষ মেরামতের বাফারের সাথে বেমানান হয়, তাহলে প্রথমে একটি চৌম্বক গুটিকা পরিশোধন করা উচিত।
1. একটি 200 μl পিসিআর টিউবে নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া প্রস্তুত করুন:
| বিকারক | আয়তন |
| খণ্ডিত ডিএনএ | পরিবর্তনশীল |
| শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিং এনজাইম মিক্স | 5 μl |
| শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিং বাফার | 10 μl |
| ডিডিএইচ2ও | থেকে 65 μl |
2. ঘূর্ণি আলতো করে এবং ভালভাবে মেশানোর জন্য সংক্ষিপ্তভাবে ঘুরুন, সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং টিউবের নীচে সমস্ত তরল সংগ্রহ করুন।
3. একটি থার্মাল সাইক্লারে নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করুন:
| তাপমাত্রা | সময় |
| 20°C | 15 মিনিট |
| 65°C | 15 মিনিট |
| 4°C | ∞ |
অ্যাডাপ্টার এলigation
1. শেষ প্রস্তুতির পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব বন্ধন প্রতিক্রিয়া নিয়ে এগিয়ে যান।
2. সারণি 1 অনুযায়ী অ্যাডাপ্টার পাতলা করুন।
3. নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করুন:
| বিকারক | আয়তন |
| শেষ মেরামত এবং এ-টেইলিং পণ্য | 65 μl |
| ফাস্ট লিগেশন বাফার | 25 μl |
| দ্রুত DNA Ligase | 5 μl |
| অ্যাডাপ্টার এক্স | 5 μl |
| মোট | 100 μl |
4. ঘূর্ণি আলতোভাবে এবং ভালভাবে মেশানোর জন্য সংক্ষিপ্তভাবে ঘুরুন, সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং টিউবের নীচে সমস্ত তরল সংগ্রহ করুন।
5. একটি থার্মাল সাইক্লারে নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করুন:
| তাপমাত্রা | সময় |
| 20°C | 15 মিনিট |
| 4°C | ∞ |
প্রস্তাবিতএসজন্য olutionপিসিআর ক্লিনআপ/আকার নির্বাচন(নির্দিষ্ট চৌম্বকীয় গুটিকা ভলিউম প্রকৃত নমুনা অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা উচিতআকার)
1. একটি উপযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 100 μl লাইগেশন পণ্য প্রস্তুত করুন।
2. নমুনায় 100 μl পুনরুদ্ধার করা ডিএনএ নির্বাচন চৌম্বক পুঁতি যোগ করুন।আলতো করে 10 বার (বা 30 সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণি) জন্য একটি পিপেট দিয়ে ঘা.ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য নমুনাগুলি সেঁকুন।
3. একটি উপযুক্ত চৌম্বক র্যাকের উপর টিউব রাখুন যাতে পুঁতিগুলি সুপারনাট্যান্ট থেকে আলাদা হয়৷সমাধানটি পরিষ্কার হয়ে গেলে, সাবধানে একটি পিপেট দিয়ে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং পরিত্যাগ করুন (জপমালা বাতিল করবেন না)।
4. চৌম্বক র্যাকে থাকাকালীন টিউবে 80% সদ্য প্রস্তুত ইথানলের 200 μl যোগ করুন।ঘরের তাপমাত্রায় 30 সেকেন্ডের জন্য সেকেন্ড করুন এবং তারপর সাবধানে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাদ দিন (পুঁতিতে বিরক্ত করবেন না)।
5. মোট দুটি ধোয়ার জন্য ধাপ 4 একবার পুনরাবৃত্তি করুন।
দ্রষ্টব্য: দ্বিতীয় ধোয়ার পরে সমস্ত দৃশ্যমান তরল অপসারণ করতে ভুলবেন না।
6. চুম্বক পুঁতির উপরিভাগে কোন স্পষ্ট গ্লস না থাকা পর্যন্ত পুঁতিগুলিকে বাতাসে শুকিয়ে দিন যখন নলটি ঢাকনা খোলার সাথে চৌম্বক র্যাকে থাকে।
দ্রষ্টব্য: পুঁতিগুলিকে অতিরিক্ত শুষ্ক করবেন না, এর ফলে ডিএনএ কম পুনরুদ্ধার হতে পারে।পুঁতিগুলি যখন ফাটতে শুরু করে, তখন সেগুলি খুব শুকনো হয়।
7. চুম্বকীয় আলনা থেকে টিউবটি সরান।টিউবে 22 μl ইলুশন বাফার (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) যোগ করুন।কমপক্ষে 10 বার উপরে এবং নীচে পাইপ লাগিয়ে বা ঘূর্ণি মিক্সারে 30 সেকেন্ডের জন্য ভালভাবে মেশান।ঘরের তাপমাত্রায় 3-5 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
8. চৌম্বক রাক উপর টিউব রাখুন.5 মিনিটের পরে (বা যখন সমাধান পরিষ্কার হয়), 20 μl সুপারনাট্যান্টকে একটি নতুন টিউবে স্থানান্তর করুন।নির্বাচন সম্পন্ন হয়েছে, এবং নির্বাচিত ডিএনএ পরবর্তী পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে বা দীর্ঘ সময়ের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
লাইব্রেরি পরিবর্ধন
1. একটি 200 μl পিসিআর টিউবে নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া প্রস্তুত করুন:
| বিকারক | আয়তন |
| ক্লিনআপ বা সাইজ নির্বাচনের পর লিগেশন পণ্য | 20 μl |
| 2× HIFI লাইব্রেরি PCR মাস্টার মিক্স | 25 μl |
| প্রাইমার মিশ্রণ | 5 μl |
| মোট | 50 μl |
2. ঘূর্ণি আলতো করে এবং ভালভাবে মেশানোর জন্য সংক্ষিপ্তভাবে ঘুরুন, সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং টিউবের নীচে সমস্ত তরল সংগ্রহ করুন।
3. একটি থার্মাল সাইক্লারে নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করুন:
| তাপমাত্রা | সময় | সাইকেল নম্বর |
| 95°C | 3 মিনিট | 1 |
| 98°C | 20 সেকেন্ড |
সারণি 2 অনুযায়ী চক্রের উপযুক্ত সংখ্যা নির্বাচন করুন |
| 60°C | 15 সেকেন্ড | |
| 72°C | 30 সেকেন্ড | |
| 72°C | 5 মিনিট | 1 |
| 4°C | ∞ | - |
প্রস্তাবিতএসজন্য olutionপিসিআর ক্লিনআপ/আকার নির্বাচন(নির্দিষ্ট চৌম্বকীয় গুটিকা ভলিউম প্রকৃত নমুনা অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা উচিতআকার)
1. একটি উপযুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 50 μl লাইগেশন পণ্য প্রস্তুত করুন।
2. নমুনায় 45 μl পুনরুদ্ধার করা ডিএনএ নির্বাচন চৌম্বকীয় জপমালা যোগ করুন।আলতো করে 10 বার (বা 30 সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণি) জন্য একটি পিপেট দিয়ে ঘা.ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য নমুনাগুলি সেঁকুন।
3. একটি উপযুক্ত চৌম্বক র্যাকের উপর টিউব রাখুন যাতে পুঁতিগুলি সুপারনাট্যান্ট থেকে আলাদা হয়৷সমাধানটি পরিষ্কার হয়ে গেলে, সাবধানে একটি পিপেট দিয়ে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং পরিত্যাগ করুন (জপমালা বাতিল করবেন না)।
4. চৌম্বক র্যাকে থাকাকালীন টিউবে 80% সদ্য প্রস্তুত ইথানলের 200 μl যোগ করুন।ঘরের তাপমাত্রায় 30 সেকেন্ডের জন্য সেকেন্ড করুন এবং তারপর সাবধানে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাদ দিন (পুঁতিতে বিরক্ত করবেন না)।
5. মোট দুটি ধোয়ার জন্য ধাপ 4 একবার পুনরাবৃত্তি করুন।
দ্রষ্টব্য: দ্বিতীয় ধোয়ার পরে সমস্ত দৃশ্যমান তরল অপসারণ করতে ভুলবেন না।
6. চুম্বক পুঁতির উপরিভাগে কোন স্পষ্ট গ্লস না থাকা পর্যন্ত পুঁতিগুলিকে বাতাসে শুকিয়ে দিন যখন নলটি ঢাকনা খোলার সাথে চৌম্বক র্যাকে থাকে।
দ্রষ্টব্য: পুঁতিগুলিকে অতিরিক্ত শুষ্ক করবেন না, এর ফলে ডিএনএ কম পুনরুদ্ধার হতে পারে।পুঁতিগুলি যখন ফাটতে শুরু করে, তখন সেগুলি খুব শুকনো হয়।
7. চুম্বকীয় আলনা থেকে টিউবটি সরান।টিউবে 22 μl ইলুশন বাফার (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) যোগ করুন।কমপক্ষে 10 বার উপরে এবং নীচে পাইপ লাগিয়ে বা ঘূর্ণি মিক্সারে 30 সেকেন্ডের জন্য ভালভাবে মেশান।ঘরের তাপমাত্রায় 3-5 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
8. চৌম্বক রাক উপর টিউব রাখুন.5 মিনিটের পরে (বা যখন সমাধান পরিষ্কার হয়), 20 μl সুপারনাট্যান্টকে একটি নতুন টিউবে স্থানান্তর করুন।নির্বাচন সম্পন্ন হয়েছে, এবং নির্বাচিত ডিএনএ 1-2 সপ্তাহের জন্য 2-8°C তাপমাত্রায় বা -20°C তাপমাত্রায় দীর্ঘ সময়ের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
[পরিশিষ্ট] ডাবল-পার্শ্বযুক্ত নির্বাচনের জন্য প্রস্তাবিত স্কিম
যদি দ্বি-বৃত্তাকার নির্বাচনের প্রয়োজন হয়, আমরা প্রত্যাশিত লাইব্রেরি আকার অনুযায়ী উপযুক্ত চৌম্বকীয় গুটিকা ভলিউম নির্বাচন করার জন্য নিম্নলিখিত স্কিম প্রদান করি।আকার নির্বাচন শেষ মেরামতের আগে বা পরিবর্ধনের পরে সঞ্চালিত হতে পারে।দুই বা ততোধিক ডাবল-রাউন্ড নির্বাচন লাইব্রেরির ফলনকে ব্যাপকভাবে হ্রাস করবে।
নীচের টেবিলে লাইব্রেরি ভলিউম 100 μl পূরণ করুন।প্রত্যাশিত লাইব্রেরি আকার অনুযায়ী দুই রাউন্ডে চৌম্বক পুঁতির আয়তন নির্বাচন করুন।এবং নিম্নলিখিত নির্দেশাবলী অনুযায়ী নির্বাচন অপারেশন চালান।
সারণি 3 ডাবল-রাউন্ড নির্বাচনের জন্য চৌম্বকীয় জপমালার প্রস্তাবিত পরিমাণ
| প্রত্যাশিত লাইব্রেরি আকার | 150bp | 200bp | 250bp | 300bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp | |
| পুঁতির আয়তন(μl) | পর্ব 1 | 100 | 90 | 80 | 70 | 60 | 55 | 50 | 45 |
| রাউন্ড 2 | 30 | 20 | 20 | 20 | 20 | 15 | 15 | 15 | |
1. একটি 200μl পিসিআর টিউবে 100 μl লাইব্রেরি ভলিউম পূরণ করুন এবং A হিসাবে লেবেলযুক্ত। টিউব A-তে টেবিল 3 (বৃত্তাকার 1) অনুসারে একটি নির্দিষ্ট আয়তনের চৌম্বক পুঁতি যোগ করুন। 30 সেকেন্ডের জন্য একটি পাইপেট দিয়ে আলতো করে ঘা দিন।ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য নমুনাগুলি সেঁকুন।
2. একটি উপযুক্ত চৌম্বক র্যাকে টিউব A রাখুন যাতে পুঁতিগুলি সুপারনাট্যান্ট থেকে আলাদা হয়৷যখন দ্রবণটি পরিষ্কার হয়, সাবধানে একটি নতুন টিউবে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং এটিকে বি হিসাবে লেবেল করুন। পুঁতি বাতিল করুন।
3. সারণী 3 (বৃত্তাকার 2) অনুযায়ী একটি নির্দিষ্ট আয়তনের চৌম্বক পুঁতি যোগ করুন B টিউবে। 30 সেকেন্ডের জন্য একটি পাইপেট দিয়ে আলতো করে ফুঁ দিন।ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য নমুনাগুলি সেঁকুন।চৌম্বক র্যাকে টিউব বি রাখুন।যখন সমাধান পরিষ্কার হয়, সাবধানে অপসারণ করুন এবং সুপারনাট্যান্ট বর্জন করুন।
4. চুম্বকীয় র্যাকে থাকাকালীন টিউব বি-তে 80% সদ্য প্রস্তুত ইথানলের 200 μl যোগ করুন।ঘরের তাপমাত্রায় 30 সেকেন্ডের জন্য সেকেন্ড করুন এবং তারপর সাবধানে সুপারনাট্যান্টটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাদ দিন (পুঁতিতে বিরক্ত করবেন না)।
5. মোট দুটি ধোয়ার জন্য ধাপ 6 একবার পুনরাবৃত্তি করুন।
দ্রষ্টব্য: দ্বিতীয় ধোয়ার পরে সমস্ত দৃশ্যমান তরল অপসারণ করতে ভুলবেন না।
6. চুম্বক পুঁতির উপরিভাগে কোন সুস্পষ্ট গ্লস না থাকা পর্যন্ত পুঁতিগুলিকে বাতাসে শুকিয়ে দিন যখন টিউব বি ঢাকনা খোলার সাথে চৌম্বক র্যাকে থাকে।
দ্রষ্টব্য: পুঁতিগুলিকে অতিরিক্ত শুষ্ক করবেন না, এর ফলে ডিএনএ কম পুনরুদ্ধার হতে পারে।পুঁতিগুলি যখন ফাটতে শুরু করে, তখন সেগুলি খুব শুকনো হয়।
7. চৌম্বক র্যাক থেকে টিউব বি সরান।টিউবে 22 μl ইলুশন বাফার যোগ করুন।কমপক্ষে 10 বার উপরে এবং নীচে পাইপ লাগিয়ে বা ঘূর্ণি মিক্সারে 30 সেকেন্ডের জন্য ভালভাবে মেশান।ঘরের তাপমাত্রায় 3-5 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
দ্রষ্টব্য: যদি লক্ষ্যযুক্ত ক্যাপচার সঞ্চালিত না হয়, ইলুশন বাফার (10mM Tris-HCl, ph 8.0-8.5) যোগ করুন।অন্যথায়, নির্বীজন করার জন্য জীবাণুমুক্ত অতি বিশুদ্ধ জল ব্যবহার করা উচিত।
- চৌম্বক র্যাকে টিউব বি রাখুন।একটি নতুন টিউবে 20 μl সুপারনাট্যান্ট স্থানান্তর করুন।
শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য
