 |
ফার্স্ট স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সিন্থেসিস কিট R1011/R1012 রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ পিসিআর রিএজেন্ট
পণ্যের বিবরণ:
| উৎপত্তি স্থল: | চীন |
| পরিচিতিমুলক নাম: | GDSBio |
| সাক্ষ্যদান: | / |
| মডেল নম্বার: | R1011/R1012 |
প্রদান:
| ন্যূনতম চাহিদার পরিমাণ: | 1 বক্স |
|---|---|
| প্যাকেজিং বিবরণ: | ছোট প্যাকেজ বা বাল্ক বিতরণ বা OEM |
| ডেলিভারি সময়: | 8 কর্মদিবস |
| পরিশোধের শর্ত: | L/C, D/A, D/P, T/T, ওয়েস্টার্ন ইউনিয়ন, মানিগ্রাম |
| যোগানের ক্ষমতা: | প্রতিদিন 100টি বাক্স/বাক্স |
|
বিস্তারিত তথ্য |
|||
| বিড়াল না.: | R1011/R1012 | একাগ্রতা: | R1011 (20 rxns), R1012 (100 rxns) |
|---|---|---|---|
| চেহারা: | বর্ণহীন | গ্রুপ: | বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ পিসিআর রিএজেন্ট |
| কার্যকলাপ: | পাস | পরিবর্ধন ক্ষমতা: | / |
| লোগো প্রিন্টিং: | লোগো প্রিন্টিং সহ | পরিবহন প্যাকেজ: | মোড়ক |
| উৎপাদন ক্ষমতা: | প্রতিদিন 100টি বাক্স/বাক্স | জমা শর্ত: | -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করুন |
| লক্ষণীয় করা: | 20 rxns রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ পিসিআর রিএজেন্ট,100 rxns রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ পিসিআর রিএজেন্ট,20 rxns প্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণ কিট |
||
পণ্যের বর্ণনা
RT - PCR কিট
শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য
বিড়াল নম্বর R1011, 20 rxns
বিড়াল নম্বর R1012, 100 rxns
কিটের উপাদান
| উপাদান | R1011 (20 rxns) | R1012 (100 rxns) |
| M-MLV (200U/μl) | 20 μl | 100 μl |
| RNasin (40U/μl) | 12 μl | 60 μl |
| অলিগো(dT)15(50μM) | 20 μl | 100 μl |
| র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার (50μM) | 20 μl | 100 μl |
| 5× প্রথম স্ট্র্যান্ড বাফার | 80 μl | 400 μl |
| RNase-মুক্ত ddH2ও | 1 মি.লি | 1 মিলি × 5 |
| dNTPs (10 মিমি প্রতিটি) | 50 μl | 250 μl |
স্টোরেজ
কিটের সমস্ত উপাদান -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা উচিত।দীর্ঘ সঞ্চয়স্থানের জন্য -70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে নিয়ন্ত্রণ RNA রাখুন।
ডিবর্ণনা
আরটি-পিসিআর কিটটি পিউরিফাইড পলি(এ)+ বা মোট আরএনএ থেকে প্রথম-স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণের জন্য অপ্টিমাইজ করা হয়েছে।RT-PCR-এর জন্য RT-PCR কিট একটি সুবিধাজনক বিন্যাসে বর্ধিত সিডিএনএ ফলন, উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের প্রতিলিপি প্রদান করে।সফল প্রথম-স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণের জন্য আপনার প্রয়োজনীয় সমস্ত উপাদান আপনি পাবেন, আপনার সময় বাঁচাতে এবং প্রতিটি পরীক্ষায় আপনার সাফল্য নিশ্চিত করে।কিট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ হল M-MLV RT-এর একটি সংস্করণ যা RNase H কার্যকলাপ কমাতে এবং বর্ধিত তাপীয় স্থিতিশীলতা প্রদানের জন্য তৈরি করা হয়েছে।এনজাইমটি 42-55°C তাপমাত্রার পরিসরে সিডিএনএ সংশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়, যা বর্ধিত নির্দিষ্টতা, সিডিএনএর উচ্চ ফলন এবং অন্যান্য বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেসের তুলনায় আরও পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের পণ্য প্রদান করে।
অ্যাপ্লিকেশন
RT-PCR-এর জন্য প্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণ
সিডিএনএ লাইব্রেরি নির্মাণ
এক-ধাপে RT-PCR
প্রাইমার এক্সটেনশন
আমিগুরুত্বপূর্ণ নোট
রাইবোনুক্লিজ দূষণ এড়ানো
পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের সিডিএনএ সংশ্লেষণের জন্য আরএনএ বিশুদ্ধতা এবং অখণ্ডতা অপরিহার্য।আরএনএ RNase A দ্বারা অবনমিত হতে পারে, যা যেকোন পরীক্ষাগার পরিবেশে পাওয়া একটি অত্যন্ত স্থিতিশীল দূষক।কিটের সমস্ত উপাদান RNase-মুক্ত কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য কঠোরভাবে পরীক্ষা করা হয়েছে।পরীক্ষাগার পরিবেশ এবং বিকারক উভয় দূষণ প্রতিরোধ করতে, সমস্ত প্রস্তুত সমাধান অবশ্যই RNase মুক্ত হতে হবে।RNase দূষণ এড়াতে সাধারণ সুপারিশ:
- ডিইপিসি-সিডিএনএ সংশ্লেষণে ব্যবহার করা সমস্ত টিউব এবং পাইপেট টিপসের চিকিত্সা করুন বা প্রত্যয়িত নিউক্লিজ-মুক্ত ল্যাবওয়্যার ব্যবহার করুন।
- আরএনএ এবং সমস্ত রিএজেন্ট পরিচালনা করার সময় গ্লাভস পরিধান করুন, কারণ ত্বক হল আরএনএসের একটি সাধারণ উৎস।ঘন ঘন গ্লাভস পরিবর্তন করুন।
- উচ্চ মানের জল সহ RNase-মুক্ত বিকারক ব্যবহার করুন (যেমন, DEPC-চিকিত্সা জল)।
- RNase-এর কার্যকলাপ থেকে RNA কে রক্ষা করার জন্য Dongsheng RNasin (#R2011) এর মত RNase ইনহিবিটার ব্যবহার করুন।
- ব্যবহার না করার সময় কিটের সমস্ত উপাদান শক্তভাবে বন্ধ রাখুন।বিপরীত প্রতিলিপি প্রতিক্রিয়ার সময় সমস্ত টিউব শক্তভাবে বন্ধ রাখুন।
টেমপ্লেট RNA
স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতি দ্বারা বিচ্ছিন্ন মোট সেলুলার আরএনএ কিটের সাথে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত।সিডিএনএ সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়াকে বাধা না দেওয়ার জন্য বিশুদ্ধ আরএনএ অবশ্যই লবণ, ধাতব আয়ন, ইথানল এবং ফেনল মুক্ত হতে হবে।আরএনএ-এর ইথানল বৃষ্টিপাতের মাধ্যমে ট্রেস দূষক অপসারণ করা যেতে পারে এবং তারপরে ঠান্ডা 75% ইথানল দিয়ে পেলেট দুটি ধোয়ার মাধ্যমে।RT-PCR অ্যাপ্লিকেশনের জন্য, টেমপ্লেট RNA অবশ্যই DNA দূষণমুক্ত হতে হবে।সিডিএনএ সংশ্লেষণের আগে, ডিএনএ-এর ট্রেস পরিমাণ অপসারণের জন্য DNase I দিয়ে আরএনএকে চিকিত্সা করা যেতে পারে।DNase I অবশ্যই ব্যবহারকারী দ্বারা প্রাপ্ত হতে হবে।সর্বদা একটি নিয়ন্ত্রণ (RT-মাইনাস) প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করুন যাতে বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ এনজাইম ব্যতীত RT-PCR-এর সমস্ত উপাদান অন্তর্ভুক্ত থাকে।
RNase H হজম
পিসিআর ধাপের সংবেদনশীলতা বাড়ানো যেতে পারে (বিশেষ করে লম্বা টেমপ্লেটের জন্য) সিডিএনএ থেকে আরএনএ টেমপ্লেটটি সরিয়ে দিয়ে: আরএনএ হাইব্রিড অণু প্রথম-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের পরে আরএনএজ এইচ দিয়ে হজম করে।প্রথম-স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের সময় RNase H-এর উপস্থিতি mRNA টেমপ্লেটকে অবনমিত করবে, যার ফলে পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের cDNA সংশ্লেষণ কমে যাবে এবং প্রথম-স্ট্র্যান্ড cDNA-এর ফলন কমে যাবে।
প্রাইমার
প্রথম স্ট্র্যান্ড cDNA এর সংশ্লেষণ অলিগো(dT)15 প্রাইমার, এলোমেলো প্রাইমার বা জিন-নির্দিষ্ট প্রাইমার দিয়ে প্রাইম করা যেতে পারে।
অলিগো(ডিটি)15 ইউক্যারিওটিক এমআরএনএর 3'-এন্ডে উপস্থিত পলি(এ) লেজ থেকে সিডিএনএ সংশ্লেষণকে প্রাইম করে।র্যান্ডম প্রাইমারগুলি মোট আরএনএ জনসংখ্যা (আরআরএনএ এবং এমআরএনএ) থেকে সিডিএনএ সংশ্লেষণ শুরু করে।অতএব, প্রথম স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণের জন্য এলোমেলো প্রাইমার ব্যবহার করার ফলে অলিগো(ডিটি)15 প্রাইমারের তুলনায় জেনারেট করা সিডিএনএর একটি বৃহত্তর জটিলতা দেখা দেয়।ফলস্বরূপ, পরবর্তী পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলির সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা হ্রাস পেতে পারে।যাইহোক, বেশ কিছু অ্যাপ্লিকেশন রয়েছে যেখানে র্যান্ডম প্রাইমার ব্যবহার করা উপকারী, যেমন পলি(A) টেল ছাড়া mRNA ব্যবহার করে cDNA সংশ্লেষণ, অথবা পলি(A)- সমৃদ্ধ RNA নমুনা ব্যবহার করে cDNA সংশ্লেষণ।
জিন-নির্দিষ্ট প্রাইমারগুলি মোট আরএনএ বা এমআরএনএর পুল থেকে নির্দিষ্ট সিডিএনএ সংশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয় এবং ব্যবহারকারীর দ্বারা প্রাপ্ত করা আবশ্যক।
প্রথম- সtrand cDNA সংশ্লেষণ পদ্ধতি
প্রথম - স্ট্র্যান্ড cDNA প্রতিক্রিয়া একটি পৃথক প্রতিক্রিয়া হিসাবে বা বিভিন্ন RNA টেমপ্লেটের সাথে সমান্তরাল প্রতিক্রিয়াগুলির একটি সিরিজ হিসাবে সঞ্চালিত হতে পারে।অতএব, প্রতিক্রিয়া মিশ্রণটি পৃথকভাবে বিকারকগুলিকে একত্রিত করে প্রস্তুত করা যেতে পারে বা টেমপ্লেট আরএনএ ব্যতীত সমস্ত উপাদান সম্বলিত একটি মাস্টার মিশ্রণ প্রস্তুত করা যেতে পারে।আরএনএ টেমপ্লেটের কাঠামোর উপর নির্ভর করে, আরএনএ বিকৃতকরণ এবং প্রাইমার অ্যানিলিং এর জন্য পৃথক পদক্ষেপ RT-PCR ফলাফল উন্নত করতে পারে।
পৃরোটোকল
আমিপ্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণ
1. নির্দেশিত ক্রমে বরফের উপর একটি জীবাণুমুক্ত, নিউক্লিজ-মুক্ত টিউবে নিম্নলিখিত বিকারকগুলি যোগ করুন:
| টেমপ্লেট RNA |
পলি(A) mRNA বা নির্দিষ্ট আরএনএ |
1-5 μg |
| প্রাইমার |
অলিগো (ডিটি)15প্রাইমার বা র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার |
1 μl 1 μl |
| DEPC-চিকিত্সা জল | 12.4 μl থেকে | |
| মোট আয়তন | 12.4 μl | |
2. আলতোভাবে মিশ্রিত করুন, সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং 5 মিনিটের জন্য 70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করুন।বরফের উপর ঠাণ্ডা করুন, নীচে ঘুরুন এবং শিশিটি বরফের উপরে রাখুন।
3. নিম্নলিখিত cDNA সংশ্লেষণ মিশ্রণ প্রস্তুত করুন, নির্দেশিত ক্রমে নিম্নলিখিত উপাদানগুলি যোগ করুন:
| 5× প্রথম স্ট্র্যান্ড বাফার | 4 μl |
| dNTPs (10 মিমি প্রতিটি) | 1 μl |
| আর নাসিন | 0.6 μl |
| এম-এমএলভি | 1 μl |
4. আলতোভাবে মিশ্রিত করুন এবং সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন।
5. অলিগো(dT) এর জন্য15, 42 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 60 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।এলোমেলো হেক্সামার প্রাইমড সংশ্লেষণের জন্য, 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 60 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।
6. 5 মিনিটের জন্য 70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করে প্রতিক্রিয়াটি বন্ধ করুন।
বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন প্রতিক্রিয়া পণ্যটি অবিলম্বে দ্বিতীয় স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়ায় ব্যবহার করা যেতে পারে বা এক সপ্তাহেরও কম সময়ের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।দীর্ঘ সঞ্চয়স্থানের জন্য, -70 ডিগ্রি সেলসিয়াস সুপারিশ করা হয়।
২.প্রথম স্ট্র্যান্ড cDNA এর PCR পরিবর্ধন
প্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণের পণ্যটি সরাসরি পিসিআর বা কিউপিসিআর-এ ব্যবহার করা যেতে পারে।প্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের আয়তন মোট পিসিআর প্রতিক্রিয়ার পরিমাণের 1/10 এর বেশি হওয়া উচিত নয়।সাধারণত, প্রথম স্ট্র্যান্ড cDNA সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের 2 μl পরবর্তী PCR-এর জন্য 50 μl মোট আয়তনে টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়।
ডংশেং বায়োটেক আপনাকে পিসিআর সাফল্য অর্জনে সহায়তা করার জন্য বিভিন্ন সিরিজের পণ্য সরবরাহ করে।এনজাইমের জন্য, আমাদের Taq পলিমারেজ, HS Taq DNA পলিমারেজ, FS Taq DNA পলিমারেজ, Pfu DNA পলিমারেজ এবং ফিউশন Pfu DNA পলিমারেজ উচ্চ বিশ্বস্ততা, দক্ষ, সংবেদনশীলতা PCR কর্মক্ষমতা প্রদান করে।দীর্ঘ পিসিআর পারফরম্যান্সের জন্য আমাদের কাছে লং টাক ডিএনএ পলিমারেজ রয়েছে।
