গোল্ড রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ পিসিআর রিএজেন্টস R3001 2000U

গোল্ড রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ R3001(2,000U)

জিপুরানো বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেস

শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য

উপাদান

স্টোরেজ

এই বিকারককে -30 ~ 15 ডিগ্রি সেলসিয়াসে রাখতে হবে।

বর্ণনা

গোল্ড রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ হল একটি নতুন রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেস যা দ্বারা প্রাপ্তভিট্রোতেM-MLV (RNase H-) বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজের উপর ভিত্তি করে আণবিক বিবর্তন।cDNA এর প্রথম স্ট্র্যান্ডটি 37~55°C তাপমাত্রায় সংশ্লেষিত হতে পারে।গোল্ড রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ আরও উল্লেখযোগ্যভাবে সংবেদনশীলতা, নির্দিষ্টতা, তাপীয় স্থিতিশীলতা এবং অর্ধ-জীবনের উন্নতি করেছে, যা জটিল গৌণ কাঠামোর সাথে RNA টেমপ্লেটের বিপরীত প্রতিলিপির জন্য খুবই উপযুক্ত।গোল্ড রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজের শক্তিশালী পলিমারাইজেশন এবং এক্সটেনশন ক্ষমতা রয়েছে, যা দীর্ঘ সিডিএনএ সংশ্লেষণ এবং পূর্ণ দৈর্ঘ্যের সিডিএনএ লাইব্রেরির উচ্চ অনুপাত নির্মাণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

উnitডিসমাপ্তি

পলি (rA)·Oligo (dT) টেমপ্লেট/প্রাইমার হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল।10 মিনিটের জন্য 37°C তাপমাত্রায়, অ্যাসিড-অদ্রবণীয় পদার্থ হিসাবে 1 nmol dTTP যোগ করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণকে 1 একক কার্যকলাপ (U) হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল।

প্রবাস্তবতাগনিয়ন্ত্রণ

Exonuclease অবশিষ্টাংশ সনাক্তকরণ: এই পণ্যের 200 U এবং 50 pmol একক-স্ট্রেন্ডেড ডিএনএ সাবস্ট্রেট 16 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করা হয়েছিল, এবং ডিএনএ ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যান্ড ডিনাচুরেশন PAGE ইলেক্ট্রোফোরসিসের পরে পরিবর্তিত হয়নি।

এন্ডোনিউক্লিজের অবশিষ্টাংশ সনাক্তকরণ: এই পণ্যের 200 U এবং pBR322 DNA এর 0.3 μg 4 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং প্লাজমিডগুলির ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যান্ডগুলি অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা পরিবর্তিত হয়নি।

RNase অবশিষ্টাংশ সনাক্তকরণ: 200 U এবং 293 কোষের RNA এর 1 μg 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং আরএনএর ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যান্ড অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা অপরিবর্তিত ছিল।

ই কোলাইডিএনএ অবশিষ্টাংশ সনাক্তকরণ: 60 ইউ-তে নিউক্লিক অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশ সনাক্ত করা হয়েছিলই.কোলিgDNA-নির্দিষ্ট TaqMan qPCR, এবং এর অবশিষ্টাংশই.কোলিজিনোম 10 কপির কম ছিল।

কার্যকরী সনাক্তকরণ 1: 200 U এনজাইম বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন সিস্টেমে যোগ করা হয়েছিল, 1 μg HeLa কোষ মোট RNA টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল, Oligo (dT)₂₃প্রাইমার হিসাবে, এবং প্রতিক্রিয়াটি 45 মিনিটের জন্য 50 ডিগ্রি সেলসিয়াসে পরিচালিত হয়েছিল। পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য 1/10 সিডিএনএ পণ্য নেওয়া হয়েছিলভিআইএনজিনইবি স্টেনিংয়ের সাথে অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস একটি একক 4.6 কেবি ব্যান্ড দেখিয়েছে।

কার্যকরী সনাক্তকরণ 2: 200 U এনজাইম বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন সিস্টেমে যোগ করা হয়েছিল, 1 পিজি হেলা সেল মোট আরএনএ টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল, অলিগো (ডিটি)₂₃প্রাইমার হিসাবে, এবং প্রতিক্রিয়াটি 50 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য পরিচালিত হয়েছিল। পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য 1/10 সিডিএনএ পণ্য নেওয়া হয়েছিলGAPDHজিনইবি স্টেনিংয়ের সাথে অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস একটি একক 550 বিপি ব্যান্ড দেখিয়েছে।

কার্যকরী সনাক্তকরণ 3: 500 এনজি হেলা কোষ টেমপ্লেট হিসাবে মোট আরএনএ, অলিগো (ডিটি)₂₃প্রাইমার হিসাবে VN, 45 মিনিটের জন্য 50°C প্রতিক্রিয়া। 1/10 সিডিএনএ পণ্যের পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য নেওয়া হয়েছিলপোলাgene.Agarose gel electrophoresis, EB staining, a single 7.1 kb (gc-rich) ব্যান্ড দেখা যায়।

বিষয়এনedingকমনোযোগ

RNase দূষণ প্রতিরোধ করুন

অনুগ্রহ করে পরীক্ষামূলক এলাকা পরিষ্কার রাখুন। অপারেশনের সময় পরিষ্কার গ্লাভস এবং মাস্ক পরিধান করা উচিত।পরীক্ষায় ব্যবহৃত সেন্ট্রিফিউগাল টিউব, পাইপটিং টিপস এবং অন্যান্য ভোগ্য সামগ্রীর জন্য RNase-মুক্ত নিশ্চিত করা হবে।

প্রাইমার নির্বাচন করুনআয়ন

ফলো-আপ পরীক্ষাis পিসিআর

যদি টেমপ্লেটটি ইউক্যারিওটিক উত্সের হয়, তবে অলিগো ডিটি সাধারণত পছন্দ করা হয়, পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের সিডিএনএর সর্বাধিক ফলনের জন্য ইউক্যারিওটিক এমআরএনএর 3 'পলি এ টেইলের সাথে যুক্ত।

জিন স্পেসিফিক প্রাইমারের (জিএসপি) সর্বোচ্চ নির্দিষ্টতা রয়েছে। যাইহোক, কিছু ক্ষেত্রে, পিসিআর প্রতিক্রিয়ার জন্য ব্যবহৃত জিএসপি কার্যকরভাবে cDNA-এর প্রথম স্ট্র্যান্ডের সংশ্লেষণকে পরিচালনা করতে পারে না। এই সময়ে, অলিগো ডিটি বা র্যান্ডম ব্যবহার করে বিপরীত প্রতিলিপি পুনরায় করা যেতে পারে। হেক্সামার্স

র্যান্ডম হেক্সামারের সর্বনিম্ন নির্দিষ্টতা থাকে এবং mRNA, rRNA এবং tRNA সহ সমস্ত RNA, র্যান্ডম হেক্সামারের জন্য টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। লক্ষ্যবস্তু অঞ্চলের একটি জটিল গৌণ কাঠামো বা উচ্চ GC বিষয়বস্তু থাকলে র্যান্ডম হেক্সামারগুলি প্রাইমার হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। , অথবা যখন টেমপ্লেটটি প্রোক্যারিওটিক হয় এবং অলিগো ডিটি বা জিন-নির্দিষ্ট প্রাইমার (জিএসপি) ব্যবহার কার্যকরভাবে সিডিএনএ সংশ্লেষণকে নির্দেশ করতে পারে না।

ফলো-আপ পরীক্ষাisqপিসিআর

অলিগো ডিটি র‍্যান্ডম হেক্সামারের সাথে মিশ্রিত হওয়ার ফলে এমআরএনএর প্রতিটি অঞ্চলে একই সিডিএনএ সংশ্লেষণ দক্ষতা দেখা যায়, যা পরিমাণগত ফলাফলের সত্যতা এবং পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা উন্নত করতে সহায়তা করে।

ডংশেং বায়োটেক আপনাকে পিসিআর সাফল্য অর্জনে সহায়তা করার জন্য বিভিন্ন সিরিজের পণ্য সরবরাহ করে।এনজাইমের জন্য, আমাদের Taq পলিমারেজ, HS Taq DNA পলিমারেজ, FS Taq DNA পলিমারেজ, Pfu DNA পলিমারেজ এবং ফিউশন Pfu DNA পলিমারেজ উচ্চ বিশ্বস্ততা, দক্ষ, সংবেদনশীলতা PCR কর্মক্ষমতা প্রদান করে।দীর্ঘ পিসিআর পারফরম্যান্সের জন্য আমাদের কাছে লং টাক ডিএনএ পলিমারেজ রয়েছে।